Лазерне лікування розацеа

Мета: вивчити вплив лазерного лікування на розацеа, поширене захворювання шкіри обличчя з симптомами почервоніння, телеангіектазії, папул, пустул і дифузного набряку шкіри, ми зосередилися на відчутті поколювання і провели імуногістохімічну оцінку щільності нервів і експресії нейропептиду. Дизайн: клінічне дослідження, а також тест на молочну кислоту (жало) проводилися до і через 3 місяці після лікування імпульсним лазером на барвнику з лампою-спалахом, а також були взяті зразки біопсії шкіри.

Пацієнти: тридцять два пацієнти з розацеа, у всіх з позитивними результатами тесту на молочну кислоту "жало", лікувалися за допомогою імпульсного лазера на барвнику з імпульсною лампою.

Основні кінцеві результати: зразки біопсії були взяті з зон носогубних складок, позитивних на жало, зафіксовані фіксатором Lanas (10% формалін і 0, 4% пікринова кислота) і проаналізовані на експресію продукту гена білка 9, 5 (загальний нервовий маркер), речовина P, пептид, пов'язаний з геном кальцитоніну, і вазоактивний поліпептид кишечника з використанням методу біотинільованого стрептавідину.

Результати: тридцять один пацієнт, у якого до лікування були позитивні результати на жало, після лікування показав зниження показників, а у 1 пацієнта до і після лікування були однакові результати тесту на укус. Кількість 9, 5-позитивних волокон по продукту гена білка в епідермісі (P < 0, 05), а також в сосочковому шарі дерми (P < 0, 01) було зменшено. Те ж саме відноситься і до речовини P в сосочковому шарі дерми (P < 0, 001), тоді як для вазоактивного кишкового поліпептиду і пептиду, спорідненого гену кальцитоніну, не було відзначено явних відмінностей. Не було виявлено відмінностей в контакті нервів і судин (позитивний фактор VIII).

Висновки: лазерне лікування розацеа, яке руйнує дрібні судини, має велике медичне значення, оскільки воно зменшує неприємні симптоми чутливої шкіри. Можлива нейрогенна етіологія поколювання.

Розацеа-поширене захворювання, особливо у світлошкірих жінок у віці від 30 до 50 років. Пацієнти часто скаржаться на підвищену шкірну чутливість. Патоетіологія захворювання поки невідома, але передбачаються ангіогенні і сальні фактори. Клінічними ознаками є постійна присутність еритеми, що супроводжується телеангіектазією, з частою домішкою почервоніння обличчя, папул, пустул, дифузного набряку і вузликів. Шкіра пацієнтів з розацеа часто вразлива до хімічних і фізичних подразників, таких як гарячі напої, спеції, алкогольні напої та використання косметичних засобів, а також може викликати укус, опік або свербіж. Цю чутливість можна об'єктивно досліджувати за допомогою тесту на укус з використанням молочної кислоти і води.

Шкіра рясно забезпечена сенсорними нервами, а деякі закінчуються вільними нервовими закінченнями в сосочковом шарі дерми або епідермісу. Вони виділяють нейропептиди, що володіють певними біологічними ефектами.

Речовина P часто пов'язана з кровоносними судинами, волосяними фолікулами і тільцями Мейснера. В епідермісі його менше. Цей нейропептид бере участь у запальних реакціях. Разом з пептидом, пов'язаним з геном кальцитоніну (CGRP), він зазвичай виявляється в аферентних с-волокнах, які беруть участь у сприйнятті свербіння і болю у людей. Вони співіснують в нервових закінченнях шкіри людини. Вазоактивний кишковий поліпептид (VIP) розподіляється в більш глибоких частинах дерми, поруч з кровоносними судинами і потовими залозами. Основними нейропептидами, що опосередковують вазодилатацію мікросудин, насправді є речовина P, CGRP і VIP.

При розацеа повідомлялося про збільшення кількості імунореактивних волокон і концентрації речовини P11 в сироватці, на додаток до більш щільного розподілу VIP-рецептор-позитивних клітин в ендотелії, а також в периваскулярних великих клітинах. Також була висунута гіпотеза, що адреналін сприяє розвитку адреналіну і сплеску брадикініну, відповідальний за розширення судин.

Імпульсний лазер на барвнику з лампою-спалахом використовує принцип селективного фототермолізу при лікуванні судинних уражень шкіри. В результаті лікування відбувається селективна коагуляція поверхневих судин без подальшого пошкодження дерми, а імпульсний лазер на барвниках з імпульсною лампою довів свою ефективність при лікуванні судинних уражень, таких як телеангіектазії. У пацієнтів з розацеа лазерне лікування дає хороше або відмінне зниження телеангіектазії і еритема. 

Мета цього дослідження полягала в тому, щоб вивчити вплив лазерного лікування на хворих з еритематотелангіектатичною розацеа у пацієнтів з еритематозно-телеангіектатичною розацеа щодо поколювання і щільності нервів з використанням паннейронального маркера продукту гена білка (PGP) і експресії нейропептидів, субстанції P, CGRP., і VIP. Крім того, були вивчені контакти між нервами і судинами.

Методи і матеріали

Предмет

У досліджувану популяцію увійшли 32 пацієнти з розацеа (31 жінка і 1 чоловік). Середній вік становив 50 років (від 31 до 67 років). У всіх пацієнтів були діагностичні критерії розацеа з клінічною картиною телеангіектазії і еритеми, а у деяких пацієнтів також було кілька папул і пустул в центральній частині обличчя. У дослідження були включені тільки пацієнти, у яких були позитивні результати тесту на жало. Цей тест використовується для виявлення сенсорного або суб'єктивного роздратування. Зразки біопсії шкіри розміром 3 мм були взяті до і через 3 місяці після лазерної обробки. Всі суб'єкти дали інформовану згоду, і дослідження було схвалено етичним комітетом каролінської лікарні, Стокгольм, Швеція.

Імпульсний лазер на барвниках з лампою-ліхтариком

У джерелі живлення використовувалася потужна лампа-спалах, що випромінює справжній імпульсний промінь з розміром плями 5 мм, тривалістю 450 мікросекунд і довжиною хвилі 585 нм, від 6 до 6, 75 Дж / см2. Результатом лікування стала пурпура, що тривала від 5 до 14 днів.

Тест на молочну кислоту (жало)

Області обличчя під очима були очищені з милом, м'яким паперовим рушником і водою, добре промиті водою і висушені. Пітливість обличчя спричинялася впливом комерційної сауни для обличчя протягом 15 хвилин. Розчин 5% молочної кислоти у воді наносили тампоном легкими круговими розтираючими рухами на одну сторону щоки з боку верхньої губи вгору по щоці. Таким же чином на протилежну щоку наносили воду в якості контролю плацебо. Через 2, 4 і 5 хвилин випробовуваних просили описати наявність і інтенсивність будь-яких шкірних відчуттів. Використовувалася наступна шкала: 0 = відсутність шкірних симптомів, 1 = легкі, 2 = помірні і 3 = важкі. Якщо сукупний бал за оцінками становить 3 або більше, суб'єкт оцінюється як»жало".

Біопсія шкіри

Зразки біопсії були взяті з області, позитивної для укусу, поперемінно з носогубної складки або під оком після ін'єкції лідокаїну гідрохлориду. Зразки біопсії були взяті до і через 3 місяці після лазерного лікування. Зразки біопсії фіксували фіксатором Lanas (10% формалін і 0, 4% пікринова кислота) (4 ° C) протягом 2 годин. Потім їх промивали холодним фосфатним буфером з 10% сахарозою (4 ° C) протягом не менше 48 годин, швидко заморожували і зберігали при -70 ° C перед подальшою обробкою.

Імуногістохімічний аналіз

Зрізи кріостата 14 мкм виготовляли на кріостаті Dittes. Зрізи інкубували протягом ночі (4 ° C) у вологій камері з первинними поліклональними антитілами, все розведеними 1: 20 000, проти PGP 9, 5 (поліклональні, кролячі), субстанції P, VIP і CGRP в фосфатно-сольовому буфері (PBS), що містить 0, 3% тритону X-100 і 0, 3% бичачого сироваткового альбуміну. Зрізи промивали в PBS і інкубували з біотинільованим кон'югованим антитілом проти козячого IgG протягом 40 хвилин. Первинні антитіла візуалізували шляхом інкубації зрізів з флуорохромом Cy2 (розведення 1: 2 000). 

В якості контролю було виключено первинне антитіло (PGP 9.5) або зразки антисироватки (речовина P, CGRP і VIP) були попередньо абсорбовані при концентрації пептидів (Bachem) 10-5 моль / л протягом ночі при + 4 ° C. ці контрольні експерименти призвели до відсутності імунореактивності.

Для подвійного фарбування, щоб вивчити контакт між нервами і судинами, зрізи інкубували з моноклональним антитілом проти фактора VIII (розведення 1: 250) з подальшим біотинільованим анти-козячим IgG (розведення 1: 200) і Texas Red (в розведенні 1: 2 000). Після цього слідувала інкубація з поліклональним антитілом проти PGP 9.5 (розведене 1: 4 000) і інкубація зі свинячим антитілом проти кролика, кон'югованим з флуоресцеїнізотіоціанатом (розведене 1: 40).

Потім зрізи промивали в PBS, поміщали в желатин / гліцерин і досліджували за допомогою епіфлуоресценції з використанням епіфлуоресцентного мікроскопа Nikon.

Флуорохром Cy2 - і флуоресцентно-ізотіоціанатно-флуоресцентні структури візуалізувалися за допомогою Куба-фільтра з збудженням від 465 до 495 нм, в той час як червоні флуоресцентні елементи спостерігалися за допомогою куба-фільтра з збудженням від 540 до 580 нм. Фотографії були зроблені за допомогою системи відеокамер, прикріпленої до флуоресцентного мікроскопа і підключеної до персонального комп'ютера.

Слайди були закодовані перед дослідженням, яке проводив наосліп 1 спостерігач. Мічені нерви підраховували у всьому епідермісі і сосочках дерми. У кожному зразку біопсії підраховували 2 зрізу і ще 2 зрізу на відстані 70 мкм від першого.

Статистичний аналіз

Загальна сума результатів тесту на жало для людей в групах до і після лікування порівнювалася з використанням одностороннього дисперсійного аналізу Краскела-Уолліса, і порівнювалися максимальні бали в будь-якому з трьох випадків (2, 4 і 5 хвилин) з точним критерієм Краскала-Уолліса з оцінкою Монте-Карло.