Лазерное лечение розацеа

Цель: изучить влияние лазерного лечения на розацеа, распространенное заболевание кожи лица с симптомами покраснения, телеангиэктазии, папул, пустул и диффузного отека кожи, мы сосредоточились на ощущении покалывания и провели иммуногистохимическую оценку плотности нервов и экспрессии нейропептида. Дизайн: Клиническое исследование, а также тест на молочную кислоту (жало) проводились до и через 3 месяца после лечения импульсным лазером на красителе с лампой-вспышкой, а также были взяты образцы биопсии кожи.

Пациенты: Тридцать два пациента с розацеа, у всех с положительными результатами теста на молочную кислоту «жало», лечились с помощью импульсного лазера на красителе с импульсной лампой.

Основные конечные результаты: Образцы биопсии были взяты из зон носогубных складок, положительных на жало, зафиксированы фиксатором Lanas (10% формалин и 0, 4% пикриновая кислота) и проанализированы на экспрессию продукта гена белка 9, 5 (общий нервный маркер), вещество P, пептид, связанный с геном кальцитонина, и вазоактивный полипептид кишечника с использованием метода биотинилированного стрептавидина.

Результаты: Тридцать один пациент, у которого до лечения были положительные результаты на жало, после лечения показал снижение показателей, а у 1 пациента до и после лечения были одинаковые результаты теста на укус. Количество 9, 5-положительных волокон по продукту гена белка в эпидермисе (P < 0, 05), а также в сосочковом слое дермы (P < 0, 01) было уменьшено. То же самое относится и к веществу P в сосочковом слое дермы (P < 0, 001), тогда как для вазоактивного кишечного полипептида и пептида, родственного гену кальцитонина, не было отмечено явных различий. Не было обнаружено различий в контакте нервов и сосудов (положительный фактор VIII).

Выводы: Лазерное лечение розацеа, которое разрушает мелкие сосуды, имеет большое медицинское значение, поскольку оно уменьшает неприятные симптомы чувствительной кожи. Возможна нейрогенная этиология покалывания.

Розацеа - распространенное заболевание, особенно у светлокожих женщин в возрасте от 30 до 50 лет. Пациенты часто жалуются на повышенную кожную чувствительность. Патоэтиология заболевания пока неизвестна, но предполагаются ангиогенные и сальные факторы. Клиническими признаками являются постоянное присутствие эритемы, сопровождающейся телеангиэктазией, с частой примесью покраснения лица, папул, пустул, диффузного отека и узелков. Кожа пациентов с розацеа часто уязвима для химических и физических раздражителей, таких как горячие напитки, специи, алкогольные напитки и использование косметических средств, а также может вызывать укус, ожог или зуд. Эту чувствительность можно объективно исследовать с помощью теста на укус с использованием молочной кислоты и воды.

Кожа обильно снабжена сенсорными нервами, а некоторые заканчиваются свободными нервными окончаниями в сосочковом слое дермы или эпидермиса. Они выделяют нейропептиды, обладающие определенными биологическими эффектами.

Вещество P часто связано с кровеносными сосудами, волосяными фолликулами и тельцами Мейснера. В эпидермисе его меньше. Этот нейропептид участвует в воспалительных реакциях. Вместе с пептидом, связанным с геном кальцитонина (CGRP), он обычно обнаруживается в афферентных С-волокнах, которые участвуют в восприятии зуда и боли у людей. Они сосуществуют в нервных окончаниях кожи человека. Вазоактивный кишечный полипептид (VIP) распределяется в более глубоких частях дермы, рядом с кровеносными сосудами и потовыми железами. Основными нейропептидами, опосредующими вазодилатацию микрососудов, на самом деле являются вещество P, CGRP и VIP.

При розацеа сообщалось об увеличении количества иммунореактивных волокон и концентрации вещества P11 в сыворотке, в дополнение к более плотному распределению VIP-рецептор-положительных клеток в эндотелии, а также в периваскулярных крупных клетках. Также была выдвинута гипотеза, что адреналин способствует развитию адреналина и всплеску брадикинина, ответственный за расширение сосудов.

Импульсный лазер на красителе с лампой-вспышкой использует принцип селективного фототермолиза при лечении сосудистых поражений кожи. В результате лечения происходит селективная коагуляция поверхностных сосудов без дальнейшего повреждения дермы, а импульсный лазер на красителях с импульсной лампой доказал свою эффективность при лечении сосудистых поражений, таких как телеангиэктазии. У пациентов с розацеа лазерное лечение дает хорошее или отличное снижение телеангиэктазии и эритема.

Цель настоящего исследования состояла в том, чтобы изучить влияние лазерного лечения на больных с эритематотелангиэктатической розацеа у пациентов с эритематозно-телеангиэктатической розацеа в отношении покалывания и плотности нервов с использованием паннейронального маркера продукта гена белка (PGP) и экспрессии нейропептидов, субстанции P, CGRP., и VIP. Кроме того, были изучены контакты между нервами и сосудами.

Методы и материалы

Предметы

В исследуемую популяцию вошли 32 пациента с розацеа (31 женщина и 1 мужчина). Средний возраст составлял 50 лет (от 31 до 67 лет). У всех пациентов были диагностические критерии розацеа с клинической картиной телеангиэктазии и эритемы, а у некоторых пациентов также было несколько папул и пустул в центральной части лица. В исследование были включены только пациенты, у которых были положительные результаты теста на жало. Этот тест используется для выявления сенсорного или субъективного раздражения. Образцы биопсии кожи размером 3 мм были взяты до и через 3 месяца после лазерной обработки. Все субъекты дали информированное согласие, и исследование было одобрено этическим комитетом Каролинской больницы, Стокгольм, Швеция.

Импульсный лазер на красителях с лампой-фонариком

В источнике питания использовалась мощная лампа-вспышка, излучающая истинный импульсный луч с размером пятна 5 мм, длительностью 450 микросекунд и длиной волны 585 нм, от 6 до 6, 75 Дж / см2. Результатом лечения стала пурпура, продолжавшаяся от 5 до 14 дней.

Тест на молочную кислоту (жало)

Области лица под глазами были очищены с мылом, мягким бумажным полотенцем и водой, хорошо промыты водой и высушены. Потливость лица вызывалась воздействием коммерческой сауны для лица в течение 15 минут. Раствор 5% молочной кислоты в воде наносили тампоном легкими круговыми растирающими движениями на одну сторону щеки со стороны верхней губы вверх по щеке. Таким же образом на противоположную щеку наносили воду в качестве контроля плацебо. Через 2, 4 и 5 минут испытуемых просили описать наличие и интенсивность любых кожных ощущений. Использовалась следующая шкала: 0 = отсутствие кожных симптомов, 1 = легкие, 2 = умеренные и 3 = тяжелые. Если совокупный балл по оценкам составляет 3 или более, субъект оценивается как «жало».

Биопсия кожи

Образцы биопсии были взяты из области, положительной для укуса, попеременно из носогубной складки или под глазом после инъекции лидокаина гидрохлорида. Образцы биопсии были взяты до и через 3 месяца после лазерного лечения. Образцы биопсии фиксировали фиксатором Lanas (10% формалин и 0, 4% пикриновая кислота) (4 ° C) в течение 2 часов. Затем их промывали холодным фосфатным буфером с 10% сахарозой (4 ° C) в течение не менее 48 часов, быстро замораживали и хранили при –70 ° C перед дальнейшей обработкой.

Иммуногистохимический анализ

Срезы криостата 14 мкм изготавливали на криостате Dittes. Срезы инкубировали в течение ночи (4 ° C) во влажной камере с первичными поликлональными антителами, все разведенными 1: 20 000, против PGP 9, 5 (поликлональные, кроличьи), субстанции P, VIP и CGRP в фосфатно-солевом буфере (PBS), содержащем 0, 3% тритона X-100 и 0, 3% бычьего сывороточного альбумина. Срезы промывали в PBS и инкубировали с биотинилированным конъюгированным антителом против козьего IgG в течение 40 минут. Первичные антитела визуализировали путем инкубации срезов с флуорохромом Cy2 (разведение 1: 2 000).

В качестве контроля было исключено первичное антитело (PGP 9.5) или образцы антисыворотки (вещество P, CGRP и VIP) были предварительно абсорбированы при концентрации пептидов (Bachem) 10–5 моль / л в течение ночи при + 4 ° C. Эти контрольные эксперименты привели к отсутствию иммунореактивности.

Для двойного окрашивания, чтобы изучить контакт между нервами и сосудами, срезы инкубировали с моноклональным антителом против фактора VIII (разведение 1: 250) с последующим биотинилированным анти-козьим IgG (разведение 1: 200) и Texas Red (в разведении 1: 2 000). После этого следовала инкубация с поликлональным антителом против PGP 9.5 (разведенное 1: 4 000) и инкубация со свиным антителом против кролика, конъюгированным с флуоресцеинизотиоцианатом (разведенное 1: 40).

Затем срезы промывали в PBS, помещали в желатин / глицерин и исследовали с помощью эпифлуоресценции с использованием эпифлуоресцентного микроскопа Nikon.

Флуорохром Cy2– и флуоресцентно-изотиоцианатно-флуоресцентные структуры визуализировались с помощью куба-фильтра с возбуждением от 465 до 495 нм, в то время как красные флуоресцентные элементы наблюдались с помощью куба-фильтра с возбуждением от 540 до 580 нм. Фотографии были сделаны с помощью системы видеокамер, прикрепленной к флуоресцентному микроскопу и подключенной к персональному компьютеру.

Слайды были закодированы перед исследованием, которое проводил вслепую 1 наблюдатель. Меченые нервы подсчитывали во всем эпидермисе и сосочках дермы. В каждом образце биопсии подсчитывали 2 среза и еще 2 среза на расстоянии 70 мкм от первого.

Статистический анализ

Общая сумма результатов теста на жало для людей в группах до и после лечения сравнивалась с использованием одностороннего дисперсионного анализа Краскела-Уоллиса, и сравнивались максимальные баллы в любом из трех случаев (2, 4 и 5 минут) с точным критерием Краскала-Уоллиса с оценкой Монте-Карло.

Для анализа разницы в общем количестве нервных волокон, содержащих нейропептиды, в группах до и после лечения использовали критерий знаковых рангов Вилкоксона. Уровень значимости был установлен на P <0,05.

Полученные результаты

Тест на молочную кислоту (жало)

Из 32 пациентов, у которых до лечения были положительные результаты на укус, у 24 после лазерной терапии он стал отрицательным. У семи пациентов было меньше кожных симптомов, а у 1 пациента не было никаких изменений. Средний кумулятивный балл ± стандартное отклонение составлял 6 ± 1,9 до лечения и 1 ± 1,6 после лечения (P <0,001) (рис. 1).

Белковый генный продукт 9,5

В эпидермисе было несколько нервов, доходящих также до рогового слоя, и в дерме, отдельных и в пучках, особенно вокруг волосяных фолликулов, потовых желез и сосудов.

Наблюдалось уменьшение количества нервных волокон, положительных по PGP 9,5, в эпидермисе (P <0,05) и папиллярной дерме (P <0,01) со средним значением ± SD 39 ± 14,6 на одно сечение до и 34 ± 17,7 на одно сечение после лазерной обработки. В сосочковом слое дермы медиана ± стандартное отклонение составляла 46 ± 28,7 до и 35 ± 21,3 после лазерной обработки (рис. 3).

Вещество p

Иммунореактивность вещества P наблюдалась в тонких волокнах эпидермиса и дермы. Однако в эпидермисе было видно только несколько волокон. Некоторые волокна были замечены вблизи кровеносных сосудов и волосяных фолликулов. В дермальных сосочках наблюдалось уменьшение (P <0,001) количества волокон, положительных по веществу P, со средним значением ± стандартное отклонение 3 ± 2,2 до и 1 ± 1,5 после лечения.

Пептид, родственный гену кальцитонина

Волокна, положительные по CGRP, наблюдались в основном в виде толстых и редко тонких коротких волокон в дерме, но не в эпидермисе (не показано). Их можно было увидеть в связи с волосяными фолликулами, но не многие из них находились близко к сосудам. В дермальных сосочках среднее число положительных волокон ± стандартное отклонение составляло 1 ± 0,1 до и 0 ± 0,1 после лечения (P ≥ 0,05).

Вазоактивный кишечный полипептид

Вазоактивные кишечные полипептид-положительные волокна наблюдались в папиллярной и ретикулярной дерме в виде тонких жемчужных волокон, иногда приближающихся или контактирующих с эпидермисом и акросирингием. Они находились близко к более глубокой части волосяного фолликула и контактировали с кожными железами. Вазоактивный кишечный полипептид можно также увидеть в волокнах вокруг потовых эккринных спиралей, а также в связи с глубокими сосудами. В дермальных сосочках не было разницы в среднем количестве положительных волокон ± стандартное отклонение (1 ± 4,9 до и 1 ± 4,2 после лечения).

Контакт между нервами и сосудами

Не было разницы в количестве контактов между нервами и сосудами, со средним значением ± стандартное отклонение 6,5 ± 4,6 до и 5 ± 3,6 после лазерной обработки.

Обсуждение исследования

Настоящее исследование показывает снижение чувствительности кожи лица после лазерного лечения у пациентов с розацеа. Импульсный лазер на красителе с лампой-вспышкой использует принцип селективного фототермолиза при лечении сосудистых поражений кожи. Он создает настоящий импульсный луч длительностью 450 микросекунд и длиной волны 585 нм с размером пятна 5 мм. Целевым материалом является гемоглобин, а поверхностные сосуды избирательно и полностью коагулируют. Исследования на длинах волн, превышающих 585 нм, показывают, что он разрушает сосуды в верхней части дермы. Поверхностные сосуды, содержащие кровь, будут поглощать лазерный свет до того, как достигнет более глубоких сосудов-мишеней. Таким образом, предполагается, что основной пораженной тканью будут сосуды, но, кроме того, меланоциты, которые поглощают лазерный свет (418-542 нм) в базальном эпидермисе могут быть в некоторой степени повреждены при облучении 577 нм на расстоянии примерно 5 мм от дермально-эпидермального соединения.

В этом исследовании плотность нервных волокон и количество иммунореактивных нервных волокон к веществу P были уменьшены, что может говорить о нейрогенном компоненте, способствующем розацеа / жалящему состоянию. Это уменьшение количества наблюдалось также и в отношении поверхностных нервов. Вероятное объяснение может заключаться в том, что производство нейротрофических факторов снижается из-за повреждения сосудов. Однако нервные волокна могут быть разрушены непосредственно под воздействием лазера в результате повреждения базального эпидермального уровня. Еще один параметр, который может говорить в пользу прямого воздействия на нервы, - отсутствие значительного уменьшения количества контактов между нервами и сосудами до и после лазерной обработки. Биопсия была взята через 3 месяца после лазерной терапии. Однако обработка кожи импульсным лазером на красителе может уменьшить количество нервных волокон на значительное время. Доказано, что эксимерная лазерная терапия роговицы вызывает дегенерацию нервов не менее 1 года.

В этом исследовании не было никакого влияния на количество VIP- и CGRP-положительных волокон. Хотя волокна, положительные по веществу P и CGRP, совместно локализованы в ганглиозных клетках тройничного нерва, некоторые ганглиозные клетки имеют только экспрессию CGRP. Пептид, связанный с геном кальцитонина, также обнаружен в волокнах A, и, возможно, они более устойчивы к воздействию лазер. Таким образом, можно предположить, что сенсорные нервы выполняют эффекторную функцию в коже, положительной по стингеру. Эта гипотеза подтверждается тем фактом, что инъекция вещества P в кожу человека вызывает сыпь и волдыри, сравнимые с реакцией, наблюдаемой после аналогичной инъекции гистамина.

В заключение мы показали, что импульсный лазер на красителе с лампой-вспышкой может быть использован в качестве эффективного средства лечения чувствительной кожи при розацеа. Этот эффект может быть достигнут за счет воздействия на поверхностные С-волокна, прямо или косвенно через воздействие на сосуды.